在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,這些問題從細(xì)胞生長角度來說,針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好,甚至死亡的原因,粗纖維測定儀廠家我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因: ?胰蛋白酶消化過度;?支原體污染;?培養(yǎng)基ph值過堿(nahco3分解);?細(xì)胞老化;?接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法: ?縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度; ?分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;?使用無菌醋酸溶液調(diào)整ph值或充入無菌co2;?啟用新的保種細(xì)胞;?調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。二、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢可能原因:?由于更換不同培養(yǎng)液或血清; ?培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞; ?培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染; ?試劑保存不當(dāng); ?接種細(xì)胞起始濃度太低; ?細(xì)胞已老化; ?支原體污染 。解決方法: ?比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液; ?換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子;?用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;?血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;?增加接種細(xì)胞起始濃度; ?換用新的保種細(xì)胞; ?分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
三、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好可能原因:?細(xì)胞本身的狀態(tài)細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;細(xì)胞的接種量:接種量過低,細(xì)胞生長緩慢;細(xì)胞傳代時間過晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長;胰酶消化時間過長或過短:時間過長,細(xì)胞死亡;時間過短,細(xì)胞未完全分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速融。?污染支原體污染;霉菌污染。?培養(yǎng)基或血清更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證;選擇的培養(yǎng)基是否合適;培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。?培養(yǎng)環(huán)境co2供應(yīng)是否正常;培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。解決方法:根據(jù)以上四個方面的可能原因,做出針對性的解決方案?注意細(xì)胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù)、接種量等;?避免產(chǎn)生污染(用正規(guī)、合法、可溯源的血清);?要用合適的血清或培養(yǎng)基,最好經(jīng)過驗(yàn)證;?注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。四、培養(yǎng)細(xì)胞死亡可能原因: ?培養(yǎng)箱內(nèi)無co2; ?培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大; ?細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷; ?培養(yǎng)液滲透壓不正確; ?培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。解決方法: ?檢測培養(yǎng)箱內(nèi)co2; ?檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度; ?取新的保存細(xì)胞種; ?檢測培養(yǎng)液滲透壓; ?換入新鮮培養(yǎng)液。下面為您推薦esco產(chǎn)品——celcradle系列生物反應(yīng)器—高密度細(xì)胞培養(yǎng)的最佳搖籃
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